第4章蛋白质的共价结构1蛋白质通论1.2构象和组织层次结构层次：一级结构（1°）（primarystructure)二级结构（2°）（secondarystructure）超二级结构（supersecondarystructure）结构域（structuraldomain）三级结构（3°）（tertiarystructure）四级结构（4°）（quarternarystructure）各个结构层次之间的关系可以作下列表示：一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→四级结构1.3蛋白质功能的多样性荧光素酶血红蛋白（氧转运蛋白）角蛋白2蛋白质的一级结构肽键：反式构型二肽三肽四肽肽链：氨基酸通过肽键连接起来而形成的链。肽单位2.2肽的化学性质双缩脲反应：肽和蛋白质特有的。含有两个或两个以上的肽键化合物与CuSO4碱性溶液生成紫红色或蓝紫色的复合物。用分光光度计测定蛋白质含量。2.3天然存在的活性肽①多肽激素②多肽抗菌素L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-ValL-OrnL-OrnL-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu短杆菌肽S(环十肽)由细菌分泌的多肽，有时也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。如鸟氨酸（Ornithine,缩写为Orn）。+H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-Met-脑啡肽与真核生物的RNA聚合酶和牢固结合CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH3蛋白质一级结构的测定Sanger于1953年第一个测定氨基酸序列---牛胰岛素（insulin）(获1958年诺贝尔化学奖)DNFB(2,4-二硝基氟苯)——N末端蛋白质的N-末端或C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量3.2拆分蛋白质的多肽链和断开多肽链内的二硫桥29水解破坏肽健313.4N末端和C末端氨基酸残基的鉴定DNFBDNFB②丹磺酰氯法（DNS法）③苯异硫氰酸(酯)法（PITC法、Edman降解法）特点：剩下的肽链仍是完整的。每次只从蛋白质的N端解离和鉴定一个aa残基④氨肽酶法(2)C末端①还原法②肼解法③羧肽酶法C末端氨基酸②肼解法③羧肽酶法3.5多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化溴化氰（CNBr）:只断裂Met的羧基形成的肽健463.6肽段氨基酸序列的测定48多用两种水解方法降解，得到两套肽段，经两套肽段序列的重叠拼接得到整个肽链全长序列。氨基末端残基H羧基末端残基S溴化氰3.8二硫桥位置的确定胃蛋白酶水解(专一性低，切点多；作用pH（~2）防止二硫键发生交换反应）Brown及Hartlay的对角线电泳技术（过甲酸断裂二硫键）4蛋白质的氨基酸序列与生物功能系统树：分析细胞色素c序列并找出连接分支的最小突变残基数的方法。5肽和蛋白质的人工合成肽的人工合成①液相合成法（1）一个氨基酸的氨基和另一个氨基酸的羧基被保护基封闭（2）在缩合剂作用下缩合形成二肽(肽键不能自发形成)②固相肽合成固相肽合成64Exercise答：（1）酸水解得Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val；可知氨基酸的种类和数量（2）Sanger试剂处理得DNP-Ala由于Sanger试剂(DNFB)反应可鉴定N末端氨基酸残基，所以Ala位于此八肽的N端。N末端:Ala(3)胰蛋白酶处理→以Sanger试剂处理,胰蛋白酶：水解Lys和Arg的羧基形成的肽健Ala，Arg，Thr和DNP-AlaN末端:Ala三肽顺序为Ala-Thr-ArgLeu，Met，Phe，2Val，和DNP-ValN末端:ValAla-Thr-Arg–Val…..(4)溴化氰处理→Sanger试剂处理由于溴化氰（CNBr）断裂Met的羧基形成的肽健Ala，Arg，高丝氨酸内酯，Thr，2Val和DNP-AlaN末端:Ala…………MetLeu，Phe和DNP-LeuN末端:LeuLeu-Phe所以Ala…………Met-Leu-Phe(5)重叠肽段法:Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val八肽的N末端AlaAla-Thr-Arg-Val….Ala…………Met-Leu-Phe名词解释作业题