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一、真菌的形态特性菌丝和孢子的形态因菌而异,是鉴定真菌的重要依据。孢子又分为多种,如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。二、真菌菌落特性1.酵母型菌落是单细胞真菌的菌落,形态与细菌菌落相似,较大,表面光滑湿润柔软、边缘整齐,如新生隐球菌。2.类酵母型菌落如白假丝酵母菌,形成假菌丝,伸人培养基中。3.霉菌型菌落是多细胞真菌的菌落。菌落呈棉絮状、绒毛状,并产生不同的色素,如皮肤癣菌。第二节标本采集及检验程序2.各种分泌物和排泄物:生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。3.血液和体液:体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。4.脓汁及渗出物。(二)采集标本注意事项2.在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集,对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。3.采集的标本量要足血液和脑脊液标本5ml,胸腔液20ml,皮屑标本两块,活体组织两份(一份送病理科检查,一份作镜检和培养)。4.严格无菌操作并进行消毒处理,尤其是采集血液和脑脊液标本,要避免污染杂菌。5.采集标本立即送检深部真菌标本最长不得超过2h。第三节真菌检验直接镜检的意义③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。直接镜检也有局限性:①阴性结果不能排除真菌感染;②有假阳性结果。因此,对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。(二)抗原检测用胶乳凝集试验检测标本中的白假丝酵母菌甘露聚糖抗原。用胶乳凝集试验和ELISA检测血清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗原,在治疗前检测非常敏感特异。用半定量放射免疫法检测血清、尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循环多糖抗原,可快速诊断。二、真菌的分离培养①菌落性质:酵母菌还是霉菌;②菌落大小,病原性真菌菌落小,而条件致病性真菌菌落大;③菌落颜色病原性真菌颜色淡,污染真菌颜色深;④致病性真菌菌落下沉,有时使培养基开裂;污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。三、真菌的生化反应2.同化碳源试验含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45℃)混合,然后在培养基上分别加糖,置25℃孵育观察结果。若24h后无变化可重复加糖。如能同化周围有生长圈,否则无生长。3.同化氮源试验同化碳源试验相同,但需用无氮源的培养基,不要加糖类,而加入硝酸钾。四、动物实验五、核酸检测(一)G+Cmol%分类鉴定法(二)真菌核型的脉冲电泳分析原理:PFGE有两个方向的电场在设定的脉冲时间里交替变换,使大分子DNA在移动中不断改变自己的形状及迁移方向,从而绕过细小的凝胶孔隙而得以分离。较大的DNA分子泳动慢些,较小的快些,有许多因素影响电泳带型,分离真菌等大分子量的DNA宜用较低电压和较长脉冲时间。用PFGE分析真菌核型,可直接比较其遗传背景,从电泳核型差异中进行分类鉴定,又能取得基因结构的基本数据,构建出大尺度物理图谱。(三)随机扩增多态性DNA(RAPD)分析六、真菌毒素的检测检测真菌毒素有许多方法,如检测黄曲霉毒素有生物学方法和ELISA法等。生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性,如用鸡胚、小白鼠作毒性试验,观察动物中毒死亡或出现肿瘤。ELISA法操作简便,并具有安全快速高效、费用低,适用于大批量标本的筛选。