(一)、蛋白质的相对分子量(二)、蛋白质的两性电离及等电点(三)、蛋白质的胶体性质(四)、蛋白质的沉淀反应(五)、蛋白质的变性(六)、蛋白质的颜色反应（一）蛋白质的相对分子质量(Mr)根据化学成分测定最小相对分子质量测定蛋白质分子中某一特殊成分的百分含量根据其百分含量可计算出最低相对分子质量（假定蛋白质分子中该成分只有一个）。如所含已知成分不是一个单位，则真实相对分子质量等于最小相对分子质量的倍数。最小相对分子质量＝（已知成分的相对分子、原子质量）/已知成分的百分含量蛋白质电泳的方向、速度取决于其所带电荷的正负性、电荷数以及分子颗粒大小。自由界面电泳：蛋白质溶于缓冲液中进行电泳。圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。区带电泳：将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分形成带状区域。（1）纸上电泳：用滤纸作支持物。（2）凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。平板电泳：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。等电聚焦电泳：利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。（三）蛋白质的胶体性质（四）蛋白质的沉淀反应（五）蛋白质的变性(denaturation)复性(renaturation)定义：当变性因素除去之后，已变性的蛋白质又可重新回复到天然构象，这一现象叫复性。变性的应用①利用变性：酒精消毒高压灭菌血清化验重金属盐中毒②防止变性：低温保存生物制品核糖核酸酶变性与复性作用反应名称蛋白质的紫外吸收光谱八、蛋白质的分类2.分子组成3、电泳：根据性质：蛋白质的两性解离影响因素：电荷种类及数量、分子大小及形状、溶液离子强度及pH等1.凝胶电泳2.SDS-PAGE电泳法3.双向电泳4、层析（chromatography)（1）离子交换层析：电荷（2）分子筛（凝胶过滤层析）：分子大小及形状（3）亲和层析：生物特性测定多肽链的N－端氨基酸：(1)2，4—二硝基氟苯(DNFB)法(2)异硫氰酸苯酯(PITC)法，又称Edman降解法，(3)氨肽酶法测定多肽链的C－端氨基酸：(1)还原法：用硼氢化锂(LiBH4)试剂可将C-端氨基酸还原成相应的α－氨基醇。肽链完全水解后，代表C－末端氨基酸的游离的α－氨基醇可用层析法加以鉴定。(2)羧肽酶1.胰蛋白酶水解Lys和Arg残基的羧基端；2.胰凝乳蛋白酶水解芳香族氨基酸残基的羧基端，如Phe、Trp、Tyr。必需氨基酸------人体自身不能合成或合成速度不能满足人体需要，必须从食物中摄取的氨基酸。对成人来说，这类氨基酸有8种，包括亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、色氨酸和苯丙氨酸。非必需氨基酸------人体可以自身合成或由其它氨基酸转化而得到，不一定非从食物直接摄取不可。1.氨基酸的结构式、分类、三字母代号；2.氨基酸的重要理化性质：两性解离和pI；3.蛋白质1-4级结构层次特点、作用力；4.蛋白质的重要理化性质:胶体性质、蛋白质沉淀、变性；5.蛋白质纯化及分子量测定方法和原理;6.氨基酸序列测定（DNFB、PITC、蛋白酶）；7.名词解释：pI，必需氨基酸，别构效应，构象，肽平面，超二级结构，结构域，蛋白质变性测定多肽链的C一末端氨基酸的方法有：(1)还原法：用硼氢化锂(LiBH4)试剂可将C-端氨基酸还原成相应的α－氨基醇。肽链完全水解后，代表C－末端氨基酸的游离的α－氨基醇可用层析法加以鉴定。Sanger早期就是采用这种方法测定胰岛素A、B链的C-末端残基。(2)肼解法：是目前测定C－末端氨基酸残基的最重要的化学方法。多肽链与无水肼加热发生肼解，所有的肽键均断裂，除C－末端氨基酸以游离形式存在外，其他的氨基酸都转变为相应的酰肼化台物。肼解后产生的C一末端氨基酸，可用层析法加以鉴定。(3)酶法：羧肽酶是一类肽链外切酶，专一地从肽链的c—末端开始逐个降解，释放出游离的氨基酸。问答题和计算题氢键、范德华力、疏水相互作用力、盐键，均为次级键氢键、范德华力虽然键能小，但数量大疏水相互作用力对维持三级结构特别重要盐键数量小二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋白质分子构象越稳定凝胶过滤法填料内部为多孔网状结构。一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外；洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大。商品名：Sephadex；Sepharose4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS:十二烷基硫酸钠，变性剂普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、大小、形状）用SDS和巯基乙醇（打开二硫键）处理蛋白质变性（肽链