和检测与临床应用课件Twosetsofprimers,eitherforwardorreverseprimerscanbedesigned.2235-2253del182240-2257del182236-2250del15因此设计两条上游（或下游）引物，使其3′末端分别与突变位点碱基匹配和错配，共用下游（或上游）引物，分别扩增野生型和突变型目的片断。2239-2251>C(complex)如重复检测3次均显示扩增曲线阳性，该样本结果判读为突变型；5’-CCTCTATTGTTGGATCATATTCGTC-3’2307-2308insGCCAGCGTG2307-2308insGCCAGCGTG95°C预变性10分钟95°C15秒KRAS基因野生型的非小细胞肺癌患者能从小分子酪氨酸激酶抑制剂（TKI，如吉非替尼、厄洛替尼）治疗中获益，而基因突变的患者易发生抵抗；KRAS基因序列和常见突变ARMS-PCR和双环探针技术下游引物：1条（检验特异性）5’-CCTCTATTGTTGGATCATATTCGTC-3’IfacommonreverseorforwardprimerisusedinaPCRreaction,thereactioniscalledallele-specificPCR(AS-PCR).当3’端是中度错配（A/A，C/C，G/G或T/T）则需要引入中度的错配。结直肠癌患者检测KRAS突变相关指南美国FDA（2013）批准对拟采用阿法替尼、厄洛替尼等EGFR-TKI治疗的患者进行EGFR突变检测的试剂盒（therascreenEGFRRGQPCRKit和cobas®EGFRMutationTest）；E746-S752>A2012年7月6日批准第一个用于结直肠癌的基因检测（Qiagen），以判断西妥昔单抗是否有效；2239-2251>C(complex)KRAS基因突变影响结直肠癌药物疗效阳性对照：包含7种突变的质粒DNA模板（测序）L747-T751del而EGFR野生型的患者的有效率在10%以下。MgCl2终浓度：3.2，大小约200kb，是上皮生长因子（EGF）细胞增殖和信号传导的受体。对腺癌、大细胞癌、非小细胞肺癌等肺癌组织学类型，EGFR检测为一类推荐。2012年7月6日批准第一个用于结直肠癌的基因检测（Qiagen），以判断西妥昔单抗是否有效；2236-2250del15下游引物：5’-CCTCTATTGTTGGATCATATTCGTC-3’如重复检测3次均显示扩增曲线阳性，该样本结果判读为突变型；L747-P753>S每个样本进行8管反应，每管反应加入共同的qPCR混合液，LNA阻滞探针及模板DNA，所不同的只有参照引物或者ARMS引物。感谢观看